Определение активности фосфатазы

глаза и зрение
Комментариев к записи Определение активности фосфатазы нет

Фосфатаза — собирательное название большой группы фермен­тов, значительно различающихся между собой не только по хи­мическим свойствам, но и по чувствительности к реакции суб­страта. Одни из них активны в щелочном субстрате (рН 8—9), другие проявляют максимальную активность в нейтральной (рН 6—7) или кислой (рН 3—5) среде.
По методу Крамера и Эрдеи [65] фосфатазную активность при естественном уровне кислотности почвы определяют следующим образом. В колбу емкостью 150 мл вносят 5 г почвы и смешивают ее с 2,5 г толуола. Спустя 15 минут добавляют 20 мл 0,5—2%-но – го раствора динатрийфенилфосфата и смесь инкубируют при 37 °С. Через 2—24 часа добавляют 100 мл 0,5%-ного раствора квасцов, содержимое колбы энергично встряхивают и затем филь­труют на складчатом фильтре. Количество субстрата и длитель­ность инкубации следует подбирать с таким, расчетом, чтобы сте­пень гидролиза фенола не превышала 10%. 5 мл фильтрата, со­держащего 0,08—0,02 мг фенола, вносят в мерную колбу на 25 мл, добавляют 5 мл боратного буфера с рН 9,4 и четыре капли реак­тива Гиббса (раствор 0,125 г 2,6-дибромхинонхлоримида в 10 мл спирта). Объем раствора в мерной колбе доводят до метки и за­тем при длине волны 600—650 нм измеряют плотность окраски раствора.
Контролем служит почва, выдержанная в течение 3 часов в сушильном шкафу при 180 °С. Необходим еще один контрольный опыт, который ставится на одних растворах без почвы.
Количество гидролизованной фосфорной кислоты выражают в миллиграммах Р2О5, накопившегося в 1 г абсолютно сухой поч­вы за 24 часа.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

AMedicalz.ru