Витаминная смесь

глаза и зрение
Комментариев к записи Витаминная смесь нет

После внесения витаминной смеси, разведения определяемо­го витамина (для построения калибровочной кривой) и фильтра­та культуральной жидкости готовят дрожжевую суспензию для посева в питательную среду. Петлей для посева отбирают не­большое количество двухсуточной дрожжевой культуры, выра­щенной на мальтозном агаре, и переносят его в пробирку, со­держащую 10 мл стерильной дистиллированной воды. Для сус- пеидирования клеток петлю для посева прижимают к стенке пробирки примерно на 10 мм выше уровня воды, оставляя кусо­чек культуры размером с булавочную головку. Затем петлю из­влекают и прокаливают, вновь вводят в пробирку, растирают культуру по стенке с небольшим количеством воды и смывают в воду. Вращая пробирку между ладонями, материал равномерно суспендируют в жидкости. Следует отметить, что при определе­нии тиамина готовят очень разбавленную суспензию клеток, который пригоден также для определения пиридоксина. В первом случае 1 мл суспензии содержит около 3000 клеток, во втором — несколько больше. При приготовлении суспензий нужно избегать условий, вызывающих помутнение жидкости. В культуральную жидкость нельзя вносить много клеток, так как вместе с суспензией в нее может попасть и ви­тамин из питательной среды.
При посеве в каждую пробирку вносят 1 каплю суспензии, пробирки устанавливают в термостат в наклонном положении. Для этого наиболее удобны штативы, предназначенные для при­готовления скошенного агара. В результате культура имеет большую площадь соприкосновения с воздухом и дрожжи раз­множаются быстрее. Период инкубации в термостате при 30 °С — 48 часов.
По окончании инкубации методом нефелометрии измеряют по­казатели светопоглощення культур, выращенных с целью по­строения калибровочной кривой. Если культура слишком густа, содержимое всех пробирок следует соответствующим образом разбавить. Как и при проведении фотоколориметрических изме­рений, в данном случае можно использовать лишь среднюю, вос­ходящую часть калибровочной кривой. Сравнение степени по­мутнения исследуемого субстрата не следует проводить по верх­ним и нижним участкам, переходящим в плато. В подобных случаях опыт необходимо повторить с учетом поправки на ко­личество внесенного фильтрата. Определение проводят в четы­рех параллельных опытах, полученные результаты пересчитыва­ют на 1 мл субстрата.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

AMedicalz.ru